JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:22 min. • July 8th, 2025
Weź mysie embrionalne komórki macierzyste lub mESC, zawieszone w pożywce różnicującej i inkubuj.
W kulturze zawiesinowej mESC agregują się, tworząc strukturę zwaną ciałami embrionalnymi lub EB.
EB to trójwymiarowe agregaty, które naśladują rozwijający się zarodek i mogą różnicować się w komórki nerwowe.
Przenieś EB do rurki i pozwól im osiąść grawitacyjnie.
Usunąć pożywkę zubożoną w składniki odżywcze; ponownie zawiesić EB w świeżej pożywce i przenieść je do naczynia hodowlanego.
Inkubuj kulturę zawiesiny, aby ułatwić wzrost EB.
Przenieść EB zawieszone w podłożu na płytkę wielodołkową. Studzienki są pokryte białkiem adhezyjnym, co umożliwia przyczepianie się EB.
Wprowadź kwas retinowy, który dostaje się do komórek i wyzwala tworzenie kompleksu transkrypcyjnego.
Kompleks indukuje ekspresję genów, promując różnicowanie komórek w nerwowe komórki progenitorowe lub NPC, które wykazują rozszerzone procesy komórkowe.
Dodaj 1,5 miliona embrionalnych komórek macierzystych myszy do nieprzywierającej pożywki bakteryjnej w 10 mililitrach podstawowej pożywki różnicowej i inkubuj płytkę w temperaturze 37 stopni Celsjusza i 5% dwutlenku węgla, aby umożliwić utworzenie ciała zarodka.
Po dwóch dnia
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych