JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:15 min. • July 8th, 2025
Rozpocznij od pokrytej żelatyną płytki wielodołkowej zawierającej embrionalne komórki progenitorowe myszy pochodzące z embrionalnych komórek macierzystych myszy w bogatej w składniki odżywcze pożywce do różnicowania podstawowego.
Komórki progenitorowe wykorzystują te składniki odżywcze z pożywki, aby utrzymać swoją żywotność.
Inkubować, aby umożliwić przyczepienie się komórek do powierzchni pokrytej żelatyną, a następnie umyć, aby usunąć nieprzyłączone komórki i zanieczyszczenia.
Wprowadź podłoże do różnicowania podstawowego uzupełnione środkiem stabilizującym, dodatkowymi składnikami odżywczymi i czynnikami wzrostu neuronów kluczowymi dla różnicowania komórek, a następnie inkubuj.
Komórki progenitorowe zużywają składniki odżywcze i czynniki wzrostu, inicjując ich różnicowanie w neurony, które zaczynają wydłużać swoje procesy komórkowe.
Jednocześnie środek stabilizujący oddziałuje z toksycznymi metabolitami i chroni rozwijające się neurony przed uszkodzeniem oksydacyjnym, zachowując ich żywotność.
Regularnie wymieniaj pożywkę, aby utrzymać poziom składników odżywczych.
Z biegiem czasu neurony dojrzewają, rozwijając aksony – dłuższe procesy komórkowe.
Dodatkowo rozwijają również dendryty, krótsze procesy komórkowe, potwierdzające różnicowanie komórek macierzystych w neurony.
Wysiewaj około 500 000 pochodnych embrionalnych komórek macierzystych myszy w 2 mililitrach podłoża do różnicowania podstawowego na studzienkę na płytki pokryte żelatyną o stężeniu 0,1%. Losowo podziel pochodne na trzy grupy, aby przetestować trzy protokoły różnicowania fazy II. Inkubuj płytkę przez sześć godzin. Następnie przemyj komórki dwukrotnie 2 mililitrami PBS i dodaj 2 mililitry pożywki do różnicowania podstawowego, pożywki N2 B27 1 lub pożywki N2 B27 2 do każdej studzienki, w zależności od protokołu. Umieść płytki w inkubatorze i pozwól komórkom różnicować się przez kolejne 10 dni, zmieniając odpowiednie podłoże co dwa dni.