JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:01 min. • July 8th, 2025
Weź wstępnie umyte zwoje czuciowe w probówce.
Dodać roztwór dysocjacyjny zawierający mieszaninę enzymów trawiennych i inkubować.
Enzymy te rozkładają macierz zewnątrzkomórkową, uwalniając pojedyncze komórki.
Po inkubacji usunąć roztwór dysocjacyjny.
Przemyć zwoje mózgowe buforem fosforanowym i dodać świeży roztwór dysocjacyjny.
Pipetuj zwoje w górę iw dół, aby oddzielić komórki.
Przepuścić zawiesinę przez sitko do komórek, aby usunąć wszelkie grudki.
Zbierz pozostałe komórki z dna sitka i włóż je do probówki.
Zawiesinę komórkową ułożyć warstwami na probówce z gradientem gęstości i odwirować.
Na podstawie różnic w kształcie i masie komórki migrują do dolnej warstwy, podczas gdy szczątki komórkowe pozostają w górnej warstwie.
Wyrzuć górną warstwę.
Dodać świeżą pożywkę do pozostałej zawiesiny komórek i odwirować.
Odrzucić supernatant i przechowywać czuciowe komórki zwojowe do dalszego wykorzystania.
Po pobraniu zwojów czuciowych odessać 500 mikrolitrów roztworu dysocjacji zwojów z każdej probówki bez naruszania zwojów. Następnie dodaj 1 mililitr PBS do każdej próbki i poczekaj, aż zwoje osiądą na dnie probówek.
Następnie usuń PBS i dodaj 1 mililitr roztworu dysocjacji zwojów mózgu uzu
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych