JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:32 min. • July 8th, 2025
Wprowadzić dorosłe ludzkie fibroblasty skórne lub aHDF, zawieszone w pożywce z fibroblastami, do mikropłytki pokrytej białkiem macierzy zewnątrzkomórkowej. Inkubować, aby umożliwić przyleganie komórek.
Wprowadź transgeniczny wektor lentiwirusowy. Po internalizacji do komórki gospodarza wirusowe RNA jest odwrotnie transkrybowane do DNA, które integruje się z genomem gospodarza.
DNA wirusa wykazuje ekspresję czynników transkrypcyjnych i krótkich RNA spinki do włosów lub shRNA. Nukleazy komórkowe przetwarzają shRNA na małe interferujące RNA lub siRNA.
Wygenerowane siRNA degradują mRNA kodujące represory transkrypcyjne, hamując w ten sposób ich ekspresję i umożliwiając aktywację genów różnicowania neuronów.
Czynniki transkrypcyjne aktywują geny, promując różnicowanie neuronalne aHDF.
Usuń pożywkę zawierającą niezinternalizowane wektory.
Dodaj pożywkę wczesnej konwersji neuronalnej zawierającą czynniki wzrostu i małe cząsteczki, które indukują różnicowanie w komórki podobne do neuronów.
Zastąp pożywkę pożywką o późnej konwersji neuronalnej zawierającą czynniki neurotroficzne do dojrzewania do neuronów.
Dojrzałe neurony są gotowe do dalszych testów.
Przygotuj zawiesinę komórkową 1 320 00
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych