JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 5:12 min. • July 8th, 2025
Zacznij od mózgu szczeniaka myszy.
Wyizoluj móżdżek i uzyskaj plastry tkanki o odpowiedniej grubości.
Przenieść plastry na wkładki membranowe umieszczone w dołkach na płytki hodowlane zawierające pożywkę.
W studzienkach poddanych działaniu substancji pożywka zawiera neuroprotekcyjny związek testowy. W studniach kontrolnych brakuje tego związku. Inkubować.
W warunkach kontrolnych komórki Purkinjego móżdżku ulegają apoptozie, naśladując wczesny rozwój pourodzeniowy in vivo.
W studzienkach poddanych zabiegowi, w zależności od swojego potencjału, związek może chronić komórki przed apoptozą.
Umyj plastry i przymocuj je, aby zachować integralność komórkową.
Przenieś plastry do roztworu blokującego przepuszczalność, aby przepuszczalnie błony komórkowe i zablokować niespecyficzne miejsca wiązania.
Nakładka z pierwszorzędowymi przeciwciałami skierowanymi przeciwko białku wiążącemu wapń specyficznie eksprymowanemu w komórkach Purkinjego.
Przemyć i wprowadzić przeciwciała drugorzędowe sprzężone z fluoroforem skierowane przeciwko przeciwciałom pierwszorzędowym.
Wybarwić jądra barwnikiem wiążącym DNA i zamontować plastry.
Za pomocą mikroskopu konfokalnego określ ilościowo żywotne komórki Purkin
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych