Dysocjacja i hodowla neuronów z próbek tkanki hipokampa

Zacznij od próbek tkanki hipokampa zawierającej neurony i różne komórki nieneuronalne.

Dodaj roztwór enzymu proteazy. Enzym degraduje macierz zewnątrzkomórkową tkanki, inicjując dysocjację komórki.

Umyć środkiem galwanicznym w celu usunięcia pozostałości enzymów.

Kilkakrotnie pipetować strawioną tkankę, aby mechanicznie oddzielić komórki od tkanki, tworząc zawiesinę jednokomórkową.

Odwirować i usunąć supernatant. Ponownie zawiesić komórki w podłożu galwanicznym.

Wysiewać komórki na szkiełku nakrywkowym pokrytym poli-D-lizyną na płytce wielodołkowej. Lizyna zwiększa przyczepianie komórek.

Zastąp pożywkę posiewową pożywką podtrzymującą neurony, zawierającą składniki odżywcze niezbędne do przetrwania neuronów.

Odśwież połowę pożywki za pomocą pożywki konserwacyjnej zawierającej arabinozylocytozynę lub Ara-C.

Ara-C wnika do komórek i selektywnie hamuje wzrost komórek nieneuronalnych, prowadząc do ich śmierci.

Zastąp pożywkę nową pożywką podtrzymującą, aby wspomóc przeżycie neuronów.

Aby oddzielić neurony hipokampa do hodowli, rozmrozić roztwór enzymu proteazy i wstępnie podgrzać podłoże galwaniczne w temperaturze 37 stopni Celsjusza. Następnie spłucz wypreparowany hipokamp za pomocą SL