JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:08 min. • July 8th, 2025
Zacznij od indukowanych przez człowieka pluripotencjalnych kolonii komórek macierzystych hodowanych na przylegającej macierzy błony podstawnej.
Dodaj pożywkę różnicującą móżdżek zawierającą określony hormon, czynnik wzrostu i inhibitory małych cząsteczek.
Podnieś kolonie za pomocą szklanej pipety i przenieś je na bardzo niską płytkę mocującą.
Powierzchnia o niskim przyleganiu utrzymuje komórki w zawiesinie, ułatwiając ich agregację w trójwymiarowe ciała zarodkowe lub EB.
Hormon, czynnik wzrostu i inhibitory wiążą się ze swoimi odpowiednimi miejscami docelowymi, promując różnicowanie komórek macierzystych w neuronalne komórki progenitorowe.
Przenieś EB do dołków na płytkach hodowlanych pokrytych syntetycznym polimerem i białkiem adhezyjnym, aby ułatwić przyczepienie EB.
Zastąp pożywkę pożywką wolną od inhibitorów.
Komórki zaczynają migrować na zewnątrz od EB, tworząc monowarstwę 2D.
Usuń pożywkę i dodaj pożywkę do dojrzewania móżdżku.
Czynniki wzrostu w pożywce indukują dojrzewanie neuronalnych komórek progenitorowych do odrębnych prekursorów neuronów móżdżku.
W dniu zerowym dodaj 1 mililitr pożywki różnicującej móżdżek uzupełnionej 10 mikromolami Y27632 i SB431542 do każdej studzie
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych