Generowanie neuronów i komórek glejowych z ludzkich indukowanych pluripotencjalnych ciał embrionalnych pochodzących z komórek macierzystych

Weźmy na przykład ciała embrionoidalne (EB) pochodzące z ludzkich indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych. Te EB składają się z trzech listków zarodkowych.

Przenieść EBs do pokrytego matrycą naczynia hodowlanego zawierającego odpowiednią pożywkę i inkubować.

Matryca umożliwia EB przyczepienie się do naczynia hodowlanego.

Czynniki wzrostu i składniki odżywcze w pożywce ułatwiają komórkom ektodermalnym EB tworzenie agregatów neuroepitelialnych ułożonych w okrągły wzór zwany rozetą.

Odetnij fragmenty rozety i oderwij je od naczynia.

Zbierz fragmenty i zakręć je w dół.

Odrzucić supernatant i ponownie zawiesić fragmenty.

Za pomocą pipety przesuwaj fragmenty w górę i w dół, aby je rozdzielić.

Dodać żądaną liczbę komórek do pokrytej matrycą płytki studzienkowej zawierającej pożywkę różnicującą.

Składniki pożywki różnicującej ułatwiają komórkom neuronabłonkowym przekształcenie się w pełni funkcjonalne komórki neuronalne i glejowe, pierwotne komórki układu nerwowego.

Drugiego dnia odessać standardowy roztwór powlekający matrycę z wcześniej przygotowanego 60-mililitrowego naczynia i dodać do naczynia 5 mililitrów kompletnej pożywki do indukcji neuroepitelialnej lub NRI. Pracują