JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:16 min • July 8th, 2025
Zacznij od płytki hodowlanej pokrytej syntetycznym polimerem i białkiem adhezyjnym.
Dodaj nerwowe komórki progenitorowe rdzenia kręgowego zawieszone w pożywce różnicującej neurony ruchowe, uzupełnione drobnocząsteczkowym inhibitorem.
Powlekana powierzchnia płytki ułatwia przyleganie komórek.
Małocząsteczkowy inhibitor blokuje specyficzne kinazy białkowe, zapobiegając apoptozie komórkowej.
Usuń zużytą pożywkę i dodaj świeżą pożywkę różnicującą.
Pożywka zawiera związek, który wspomaga różnicowanie progenitorów neuronów w progenitory neuronów ruchowych.
Dodatkowo pojawiają się przodkowie zaangażowani w glej.
Następnie zastąp pożywką różnicującą uzupełnioną inhibitorem syntezy DNA.
Inhibitory te selektywnie indukują uszkodzenie DNA i śmierć u progenitorów glejowych, podczas gdy progenitorzy neuronów ruchowych różnicują się w dojrzałe neurony.
Umyj komórki buforem i dodaj pożywkę różnicującą bez inhibitorów, aby utrzymać neurony.
Podczas hodowli regularnie wymieniaj podłoże, aby uzupełnić składniki odżywcze.
Dodatkowo zastąp pożywkę pożywką uzupełnioną białkiem adhezyjnym, aby wzmocnić przyczepienie neuronów, ustanawiając jednorodną kulturę neuronów ruchowych.
Jeśli hodowle neuronalnych komórek progenitorowych zostały zamrożone, rozmroź je. Po wymianie pożywki i przepłukaniu PBS zgodnie z opisem w manuskrypcie, zmień pożywkę na pożywkę do różnicowania neuronów ruchowych zawierającą 0,02 mikromolowego arabinozydu cytozyny.
Następnie inkubuj komórki przez 48 godzin w temperaturze 37 stopni Celsjusza i 5% dwutlenku węgla, gdy progenitorzy zaangażowani w glej wyłaniają się jako pojedyncze proliferujące płaskie komórki pod postmitotycznymi progenitorami neuronów ruchowych zagregowanymi w klastry komórek. Później wykonaj wymianę pożywki zgodnie ze wskazaniami w rękopisie.