JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:34 min. • July 8th, 2025
Weźmy mysie szczenię cerebella.
Zhomogenizuj je na mniejsze fragmenty.
Dodaj enzym proteolityczny do trawienia macierzy zewnątrzkomórkowej tkanki, rozluźniając ziarniste komórki progenitorowe móżdżku lub CGNP i astrocyty.
Dodać pożywkę hodowlaną CGNP zawierającą surowicę, aby zatrzymać aktywność enzymatyczną. Odwirować i wyrzucić supernatant bogaty w enzymy.
Ponownie zawiesić fragmenty tkanek w pożywce CGNP. Mechanicznie dysocjuj tkankę, aby uwolnić komórki.
Gdy szczątki opadną, przenieś supernatant zawierający komórki do nowej probówki.
Odwirować i usunąć supernatant z zanieczyszczeniami.
Ponownie zawiesić komórki w pożywce CGNP i zasiać je w wielodołkowych dołkach płytkowych pokrytych poli-D-lizyną. Inkubować.
Astrocyty osiadają i silnie przylegają do powłoki poli-D-lizyny w porównaniu z CGNP.
Wstrząsnąć płytką i zebrać supernatant zawierający CGNP. Odwirować i usunąć supernatant.
Ponownie zawiesić CGNP w pożywce CGNP i umieścić je na płytce wielodołkowej pokrytej poli-L-ornityną. Inkubować.
CGNP przyczepiają się do powlekanej powierzchni i namnażają się, wspomagane przez składniki mediów i poli-L-ornitynę.
Przenieś trzy do pięciu móżdżku do 15-mililitrowych rurek. Umyj móżdżek g
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych