JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:00 min. • July 8th, 2025
Zacznij od kolonii ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych lub hPSC przyłączonych do odpowiedniego podłoża w pożywce hodowlanej.
Usuń nośnik. Dodać pożywkę neuronalną zawierającą specyficzne inhibitory i inkubować.
Inhibitory te kierują dojrzewanie hPSC w kierunku linii neuronalnej, tworząc kolonie neuroektodermalne. Są one prekursorami małych, kulistych struktur zwanych sferoidami.
Usuń pożywkę i przemyj buforem soli.
Inkubuj z enzymem trawiennym, aby oderwać kolonie od płytki.
Dodaj pożywkę neuronalną, aby zatrzymać aktywność enzymatyczną.
Zbierz kolonie i przenieś je do probówki.
Pozwól im się uspokoić, a następnie wyrzuć supernatant.
Ponownie zawiesić kolonie w pożywce neuronalnej zawierającej czynnik wzrostu.
Przenieś kolonie na płytkę wielodołkową i inkubuj.
Ten czynnik wzrostu ułatwia samoorganizację i namnażanie się komórek neuroektodermalnych, prowadząc je do utworzenia sferoidy.
Na początek umieść kolonie hPSC na matrycy błony podstawnej zakwalifikowanej do hESC z jednej studzienki 6-dołkowej płytki przy 60% konfluencji do trzech dołków, aby osiągnąć gęstość od 20% do 30%, a następnie przystąp do indukcji kolonii neuroektodermalnych 2D.
Dodawaj świeże podłoże N2
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych