JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:24 min. • July 8th, 2025
Weźmy siatkówkę szczura, światłoczułą warstwę oka zawierającą neurony zwojowe siatkówki lub RGN.
Umieść siatkówkę w zimnym roztworze soli, aby zapobiec uszkodzeniu tkanek.
Przenieś siatkówkę do roztworu zawierającego proteazę i DNazę i pokrój go na mniejsze kawałki.
Przenieść zawartość do probówki i inkubować.
Proteaza rozbija macierz zewnątrzkomórkową i rozluźnia komórki, podczas gdy DNaza degraduje wszelkie zanieczyszczające DNA.
Pipetuj w górę i w dół, aby rozproszyć grudki komórek.
Dodaj roztwór inhibitora, aby zatrzymać działanie proteazy.
Odwiruj komórki, aby je osadzić. Usunąć supernatant i ponownie zawiesić komórki w odpowiednim pożywce wzrostowej.
Dodaj tę zawiesinę komórkową do monowarstwy komórek glejowych otaczających węch lub komórek OEG, rodzaju komórek glejowych, i inkubuj.
RGN integrują się z monowarstwą OEG, ustanawiając model kokultury do oceny potencjału neuroregeneracyjnego OEG.
Umieść siatkówkę w wcześniej przygotowanym naczyniu do hodowli komórek P-60 z 5 mililitrami zimnego EBSS. Następnie przenieś go do naczynia do hodowli komórkowych P-60 z odtworzoną papainą plus 50 mikrolitrów APV i 250 mikrolitrów DNazy plus 5 mikrolitrów APV.
Pokrój siatkówkę na małe ka
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych