JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:02 min. • July 8th, 2025
Weźmy zawiesinę komórek raka embrionalnego myszy zdolną do różnicowania się w różne typy komórek.
Komórki nasienne na hydrofobowym naczyniu hodowlanym zawierającym pożywkę i kwas retinowy.
Inkubować. Powierzchnie hydrofobowe zapobiegają przyleganiu komórek, powodując tworzenie przez nie agregatów.
Kwas retinowy wnika do agregatów komórkowych, uruchamiając szlaki sygnałowe i powodując różnicowanie w neuronalne komórki progenitorowe.
Po inkubacji zebrać agregaty komórkowe.
Wyrzuć nośnik.
Dodaj pożywkę zawierającą kwas retinowy i wysiewaj agregaty na hydrofobowe naczynie hodowlane.
Inkubować. Kwas retinowy ułatwia trwałe różnicowanie komórkowe w neurony.
Zbierz agregaty i usuń nośniki.
Dodaj enzym proteolityczny, aby zakłócić adhezje komórka-komórka w agregatach.
Dodaj pożywkę zawierającą surowicę, aby zatrzymać aktywność enzymatyczną.
Mechanicznie dysocjują agregaty, tworząc zawiesinę neuronalną.
Odwirować i wyrzucić supernatant bogaty w enzymy.
Ponownie zawiesić neurony w pożywce i umieścić je na przylegającej płytce wielodołkowej zawierającej pożywkę.
Inkubować. Neurony przylegają do płytki i dojrzewają, wydłużając długie projekcje.
W celu wytworzenia agregatu należy rozpocząć od d
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych