Test mielinizacji indukowanej transdukcją in vitro dla komórek prekursorowych oligodendrocytów
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:27 min. • July 8th, 2025
Weź przylegające kultury pierwotnych komórek prekursorowych oligodendrocytów lub OPC w pożywce wzrostowej.
Dodaj kontrolne wektory lentiwirusowe do studzienki kontrolnej i wektory testowe, kodujące białka sygnałowe regulujące mielinizację, do dołka testowego, a następnie inkubuj.
Komórki internalizują wektory, a wirusowe RNA jest odwrotnie transkrybowane do DNA i włączane do genomu gospodarza, powodując ekspresję białek sygnałowych w komórkach testowych.
Wprowadzić enzymy, aby oderwać OPC od substratu.
Zneutralizuj enzymy i odwiruj, aby usunąć enzymy.
Dodaj pożywkę wzrostową i przenieś OPC na szkiełka nakrywkowe wewnątrz mikropłytki z przylegającym zwojem korzenia grzbietowego lub neuronami DRG. Pozwól, aby OPC się ustabilizowały.
Napełnij studzienki pożywką wzrostową i inkubuj. Interakcja z neuronami DRG wyzwala dojrzewanie OPC do oligodendrocytów.
Ekspresja białek sygnałowych indukuje oligodendrocyty do tworzenia osłonek mielinowych wokół neuronów DRG.
Oceń tworzenie się osłonki mielinowej indukowanej białkiem sygnałowym w komórkach badanych w porównaniu z komórkami transdukowanymi wektorem kontrolnym.
W tym protokole należy mieć pierwszorzędowe komórki prekursorowe oligodendrocy
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych