Izolowanie neuronów zwoju przedsionkowego od ucha wewnętrznego myszy

Weź połowę głowy szczeniaka myszy i usuń mózg.

Przetnij górną część czaszki i wytnij otaczającą tkankę, aby uwidocznić torebkę uszną, kostną warstwę zewnętrzną chroniącą struktury ucha wewnętrznego.

Przenieść tkankę na płytkę hodowlaną zawierającą buforowane podłoże.

Oddziel górne i dolne zwoje przedsionkowe, które zawierają ciała komórek nerwowych przedsionkowych.

Ogol kostny grzbiet i zbierz leżący pod nim górny ganglion.

Przenieść zwój górny na świeżą płytkę zawierającą zbuforowane podłoże.

Usuń przylegające tkanki z powierzchni, aby oczyścić izolowany ganglion.

Umieść ganglion w roztworze zawierającym enzymy proteolityczne.

Enzymy degradują macierz zewnątrzkomórkową tkanki, rozluźniając komórki.

Przenieś ganglion do pokrytego polimerem naczynia ze szklanym dnem zawierającego pożywkę hodowlaną i mechanicznie zdysocjuj tkankę, aby uwolnić komórki.

Inkubuj, pozwalając komórkom przylegać i ustanowić hodowlę neuronów zwoju przedsionkowego.

Wyjmij mózg uśpionej myszy za pomocą zamkniętych nożyczek chirurgicznych. Przeciąć i usunąć nerw czaszkowy, aby całkowicie odłączyć mózg od czaszki. Zaczynając od tyłu głowy, ściągnij przezroczysty błoniasty materiał kleszczami, a następnie odetni