Technika generowania organoidów mózgowych z ludzkich embrionalnych komórek macierzystych
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:25 min. • July 8th, 2025
Weźmy kolonie ludzkich embrionalnych komórek macierzystych (hESC) hodowanych na macierzy nośnej.
Odessać pożywkę i dodać enzymy, które rozkładają matrycę.
Umyj, aby usunąć enzymy. Następnie dodaj pożywkę i pipetę, aby usunąć poluzowane kolonie, rozbijając je na mniejsze grona.
Przenieś klastry do świeżej pożywki i inkubuj, pozwalając gronom uformować kuliste agregaty.
Pozwól kulkom osiąść i usuń wszelkie martwe komórki.
Inkubować z pożywką zawierającą podstawowy czynnik wzrostu fibroblastów lub bFGF w celu proliferacji komórek.
Uzupełnij pożywką zawierającą stopniowo zmniejszające się stężenia bFGF, aby ułatwić różnicowanie komórek.
Wprowadź pożywkę do indukcji neuronalnej, promując różnicowanie hESC w nerwowe komórki macierzyste lub NSC, przekształcając kulki w organoidy wykazujące strukturę przypominającą rozetę neuronalną.
Dodaj antybiotyki, aby zapobiec rozwojowi zanieczyszczających drobnoustrojów podczas długotrwałej hodowli.
NSC różnicują się w neurony i komórki glejowe, stopniowo rozwijając organoidy w złożoną strukturę przypominającą korę mózgową.
Rozcieńczyć roztwór podstawowy proteazy do stężenia roboczego, dodając 1 mililitr roztworu podstawowego do 5 mililitrów pożywki
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych