JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 7:57 min. • July 8th, 2025
Weźmy transgeniczną ciężarną mysz i chirurgicznie usuńmy macicę z zarodkami zawierającymi fluorescencyjnie znakowane neurony ruchowe.
Przenieś macicę do naczynia z lodowatym buforem pod mikroskopem fluorescencyjnym.
Użyj światła widzialnego, aby wyizolować zarodki.
Usuń pysk i ogon zarodków i ustaw je w pozycji leżącej.
Korzystając z sygnału fluorescencyjnego, wykonaj nacięcie w śródmózgowiu, aby odsłonić jądra okoruchowe i bloczkowe, które zawierają neurony ruchowe.
Wyizoluj śródmózgowie zawierające jądra.
Otwórz grzbietową stronę tyłomózgowia i rdzeń kręgowy. Odizoluj rdzeń kręgowy, wytnij oba końce i zbierz kolumny zawierające rdzeniowe neurony ruchowe.
Potraktuj pobrane tkanki enzymami, aby zdysocjować macierz tkankową. Zbierz pojedyncze komórki i wyizoluj fluorescencyjnie znakowane neurony za pomocą FACS.
Dodaj pożywkę hodowlaną do izolowanych neuronów, przenieś komórki na mikropłytkę pokrytą substratem hodowlanym i inkubuj, pozwalając komórkom przylegać i rosnąć.
Utrzymuj neurony ruchowe w kulturze.
Zacznij od pobrania zarodków Islet-1 EGF-dodatnich od ciężarnej myszy około 11,5 dnia po zapłodnieniu. Dokładnie spryskaj brzuch etanolem i usuń macicę sterylnymi nożyczkami do mi
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych