Oczyszczanie śródbłonkowych komórek prekursorowych CD31+ za pomocą sortowania komórek aktywowanych magnetycznie
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 5:32 min. • July 8th, 2025
Weź przylegającą hodowlę śródbłonkowych komórek progenitorowych lub EPC, prekursorów komórek śródbłonka mikronaczyniowego mózgu.
Hodowla, uzyskana przez różnicowanie pluripotencjalnych komórek macierzystych, składa się z dodatnich EPC dla markera powierzchniowego CD31 i zanieczyszczających komórek CD31-ujemnych.
Inkubować z odczynnikiem dysocjacyjnym w celu odłączenia komórek i przefiltrowania w celu uzyskania zawiesiny jednokomórkowej.
Dodaj pożywkę, aby zneutralizować enzymy, odwirować, aby odrzucić supernatant i ponownie zawiesić komórki w buforze.
Inkubować z odczynnikiem blokującym w celu zahamowania komórkowych receptorów Fc, zapobiegając niespecyficznemu znakowaniu.
Dodaj przeciwciało sprzężone z fluoroforem specyficzne dla CD31 i inkubuj w celu oznaczenia EPC.
Odwirować i wyrzucić niezwiązane przeciwciała. Inkubować z kompleksami przeciwciał zawierającymi jedno przeciwciało, które wiąże się z fluoroforami.
Wprowadzić nanocząstki magnetyczne pokryte polimerem i inkubować, umożliwiając nanocząstkom związanie się z drugim przeciwciałem kompleksów.
Za pomocą pola magnetycznego wyizoluj komórki związane z nanocząstkami.
Odrzucić zawiesinę z nieznakowanymi komórkami CD31-ujemnymi
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych