JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 6:24 min. • July 8th, 2025
Zacznij od nieprzylegających neurosfer, trójwymiarowego agregatu ludzkich nerwowych komórek macierzystych w pożywce pochodzącej z hodowli komórkowej.
Pożywka ta zawiera składniki odżywcze, czynniki wzrostu i składniki macierzy zewnątrzkomórkowej, które utrzymują żywotność komórek.
Wirówka w celu zebrania neurosfer.
Potraktuj je trypsyną i enzymami DNazy, wymieszaj zawartość, a następnie inkubuj.
Trypsyna zaburza adhezję między komórkami i ułatwia odrywanie komórek, podczas gdy DNaza degraduje wolne DNA, zapobiegając zlepianiu się komórek.
Kilkakrotnie odpipetować zawartość, aby utworzyć zawiesinę jednokomórkową. Następnie dodaj inhibitor trypsyny, aby zneutralizować aktywność enzymu.
Odwirować i usunąć supernatant, a następnie ponownie zawiesić komórki w pożywce proliferacyjnej zawierającej neuronalne czynniki wzrostu.
Zawiesinę komórek należy umieścić na pokrytym polimerem szkiełku nakrywkowym umieszczonym na płytce wielodołkowej. Inkubować, aby umożliwić przyczepienie się komórek macierzystych do polimeru.
Ponadto, w oparciu o wchłanianie określonych czynników wzrostu, komórki macierzyste różnicują się w progenitory nerwowe i astrocyty, które są gotowe do dalszego dojrzewania w w
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych