Generowanie komórek śródbłonka mózgu z indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych

Weź indukowaną pluripotencjalną hodowlę komórek macierzystych lub iPSC w pożywce podtrzymującej zawierającej inhibitory kinazy rho.

Czynniki wzrostu utrzymują komórki w stanie niezróżnicowanym, podczas gdy inhibitory kinazy rho zwiększają przeżywalność komórek.

Zastąp pożywkę nową pożywką podtrzymującą, usuwając inhibitory kinazy rho. Inkubuj, promując tworzenie kolonii.

Regularnie zastępuj je bezwarunkową pożywką, która zapewnia kontrolowane środowisko, wywołując różnicowanie iPSC w neuronalne komórki progenitorowe, a następnie komórki śródbłonka mózgu, a następnie proliferację komórek.

Zastąp pożywką komórkową śródbłonka zawierającą kwas retinowy i czynniki wzrostu fibroblastów. Inkubować.

Czynniki wzrostu fibroblastów ułatwiają proliferację komórek, a kwas retinowy wspomaga dojrzewanie komórek śródbłonka mózgu.

Dodaj enzymy proteolityczne, aby oderwać komórki. Zebrać komórki i odwirować. Odrzucić supernatant.

Ponownie zawiesić komórki w podłożu śródbłonkowym i umieścić je na wielodołkowej wkładce błonowej pokrytej kolagenem i fibronektyną.

Studnia zawiera pożywki śródbłonka. Inkubacja w celu selektywnego przylegania komórek śródbłonka mózgu.

Zastąp pożywkę nieuzupełnionymi pożyw