JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:52 min. • July 8th, 2025
Weźmy mysi odcinek jelita cienkiego uprzednio pozbawiony mięśnia podłużnego i splotu mięśniowo-jelitowego, warstw zawierających neurony jelitowe i komórki glejowe.
Pokrój tkankę i umieść ją w buforze zawierającym EDTA. Inkubuj z kołysaniem.
EDTA zakłóca połączenia komórka-komórka, odrywając błonę śluzową nabłonka od leżącej poniżej blaszki właściwej i błony podśluzowej, warstw tkanki łącznej zawierających komórki glejowe jelitowe.
Kilkakrotnie pipetować, aby usunąć komórki nabłonka.
Przefiltrować przez sitko do komórek i odrzucić przepływ.
Przenieś tkankę do nieenzymatycznego buforu dysocjacyjnego i inkubuj ją z kołysaniem. Bufor dysocjacyjny rozluźnia blaszkę właściwą i podśluzówkową macierz zewnątrzkomórkową, odłączając komórki.
Kilkakrotnie pipetować, aby jeszcze bardziej zdysocjować komórki.
Przefiltruj przez sitko do komórek, aby zebrać komórki.
Odwirować i ponownie zawiesić komórki w buforze.
Weź studzienki pokryte białkiem adhezyjnym zawierające pożywkę wzrostową glejową i umieść komórki na płytce.
Powłoka ułatwia adhezję komórek, podczas gdy czynniki wzrostu selektywnie promują proliferację komórek glejowych, tworząc blaszkę właściwą i hodowlę komórek glejowych podśluzówkow
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych