Oczyszczanie naczyń włosowatych z mózgu świni

Weźmy mózg świni.

Usuń opony mózgowe, błonę ochronną pokrywającą mózg, aby zapobiec zanieczyszczeniu komórek oponowych.

Zeskrob istotę szarą, obszar bogaty w naczynia włosowate, i zbierz tkankę w naczyniu hodowlanym zawierającym pożywkę.

Przepuść istotę szarą przez strzykawkę bez igły, aby rozdrobnić tkankę.

Przenieś fragmenty do homogenizatora i homogenizuj, aby dalej rozdrobnić tkankę, uwalniając naczynia włosowate mózgu.

Przepuść homogenat przez filtr o określonej wielkości porów, aby zatrzymać naczynia włosowate, umożliwiając przepływ innych komórek mózgowych.

Umieść filtr w roztworze zawierającym enzymy i DNazę.

Enzymy odrywają przylegające komórki, podczas gdy DNaza degraduje zanieczyszczające DNA, ułatwiając izolację czystych naczyń włosowatych.

Umyj naczynia włosowate z filtra.

Dodać pożywkę zawierającą białka surowicy, aby dezaktywować enzymy.

Przenieś naczynia włosowate do probówki, odwiruj i usuń supernatant. Ponownie zawiesić czyste naczynia włosowate w świeżych pożywkach w celu dalszej analizy.

Aby rozpocząć tę procedurę, umieść mózgi w sterylnej ławce przepływowej i delikatnie umyj je 1 litrem PBS w zlewce umieszczonej na lodzie. Następnie ostrożnie usuń opony mózgowe