Metoda izolacji jednostek nerwowo-naczyniowych z mózgu szczura
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:28 min. • July 8th, 2025
Zacznij od zimnej szklanej zaprawy zawierającej tkankę korową mózgu szczura, która jest najbardziej zewnętrzną warstwą mózgu.
Dodaj bufor mikronaczyń mózgowych lub BMB, zawierający inhibitory proteazy.
Teraz poruszaj tłuczkiem w górę iw dół, aby oddzielić tkankę.
To pobudzenie uwalnia jednostki nerwowo-naczyniowe lub NVU, składające się z mikronaczyń, perycytów, neuronów i komórek glejowych. Inhibitory proteazy blokują uwalniane proteazy, chroniąc mikronaczynia.
Przenieś tę mieszaninę do probówki.
Dodaj gęsty roztwór polisacharydu. Użyj wiru, aby równomiernie wymieszać roztwór z pozostałą zawartością.
wirówka. Gęste polisacharydy umożliwiają sedymentację NVU, które są gęstsze niż szczątki tkankowe.
Odrzucić supernatant i ponownie zawiesić NVU w BMB zawierającym inhibitor proteazy i roztwór polisacharydów.
Użyj wiru, aby wymieszać zawartość.
Powtórz proces wirowania. Wyrzucić supernatant w celu usunięcia wszelkich pozostałości zanieczyszczeń.
Zawieś ponownie NVU w BMB i przechowuj je do dalszej analizy.
Umieść tkankę mózgową kory mózgowej w schłodzonym szklanym moździerzu. Następnie dodaj 5 mililitrów BMB z koktajlem inhibitorów proteazy. Za pomocą górnego homogenizatora włóż tłucze
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych