Generowanie neuronów piramidowych korowych z ludzkich nerwowych komórek macierzystych
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:08 min. • July 8th, 2025
Na płytce hodowlanej pokryj szkiełko nakrywkowe poliornityną, dodatnio naładowanym polimerem i inkubuj.
Poliornityna tworzy warstwę przypominającą siatkę, która pomaga ujemnie naładowanym komórkom przyklejać się do szkiełka nakrywkowego.
Usunąć roztwór i przemyć szkiełka nakrywkowe buforowanym roztworem soli w celu usunięcia niezwiązanej poliornityny.
Dodać roztwór zawierający białko macierzy zewnątrzkomórkowej zwane lamininą i inkubować.
Laminina tworzy matrycę na szkiełku nakrywkowym pokrytym poliornityną, zwiększając przyczepianie komórek.
Odrzuć roztwór i weź niewielką liczbę nerwowych komórek macierzystych zawieszonych w pożywce wolnej od czynnika wzrostu.
Dodaj tę kulturę o niskiej gęstości na przygotowane szkiełko nakrywkowe powolnymi ruchami obrotowymi, aby równomiernie rozprowadzić komórki.
Początkowo deprywacja czynnika wzrostu sprzyja podziałowi komórek.
Z biegiem czasu komórki macierzyste różnicują się w neurony o długich projekcjach
W końcu neurony wytwarzają struktury podobne do kręgosłupa nad swoimi projekcjami, takie jak neurony piramidowe w korze mózgowej.
Aby przygotować kultury neuronalne, umieść szklane szkiełka nakrywkowe w sześciodołkowych naczyniach hodowlany
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych