JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 5:34 min. • July 8th, 2025
Weź fragment kręgosłupa szczura i podziel go, aby usunąć rdzeń kręgowy.
Odłącz zwoje korzenia grzbietowego lub DRG, skupisko neuronów otoczone satelitarnymi komórkami glejowymi lub SGC.
Umieść DRG w pożywce wzrostowej. Usuń korzenie nerwowe, aby zmniejszyć zanieczyszczenie SGC.
Potraktuj kolagenazą, aby zdegradować macierz tkankową i umyć, aby usunąć enzymy.
Wprowadź trypsynę, aby zakłócić połączenia międzykomórkowe. Dodaj surowicę zawierającą białka, które dezaktywują trypsynę.
Dodaj pożywkę wzrostową i mechanicznie oddziel tkankę. Przefiltrować zawiesinę, aby wyizolować pojedyncze komórki i odwirować, aby usunąć resztki tkanek.
Ponownie zawieś komórki, aby ułożyć je warstwowo na podłożu o gradiencie gęstości i odwirować.
Neurony o większej gęstości osiadają na dnie, ułatwiając separację SGC.
Ponownie zawiesić neurony w pożywce hodowlanej. Przenieś je na dobrze pokryty substratem hodowlanym, umożliwiając przyczepienie komórek.
Suplement z czynnikami wzrostu nerwów dla przeżycia neuronów.
Aby uzyskać neurony DRG po pobraniu rdzenia kręgowego, zacznij od usunięcia wszelkich części grzbietowych, a następnie użyj sterylnych i ostrych nożyczek chirurgicznych, aby podzielić kręgosłup na
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych