Izolowanie i hodowla perycytów mózgowych myszy

Dodaj bufor do tkanki mózgowej myszy i homogenizuj ją, aby uwolnić komórki i mikronaczynia.

Następnie dodać roztwór BSA-dekstranu do homogenatu. Wymieszaj i odwiruj, aby oddzielić składniki. Odrzucić supernatant.

Ponownie zawiesić mikronaczynia w buforze i przepuścić je przez filtr, usuwając większe naczynia.

Teraz odwirować filtrat i usunąć supernatant. Zawiesić mikronaczynia w buforze zawierającym DNA.

Dodaj enzymy proteolityczne, aby uwolnić komórki śródbłonka i perycyty.

DNazy degradują DNA.

Dodać bufor zawierający BSA, aby zatrzymać aktywność enzymu. Odwirować i wyrzucić supernatant.

Ponownie zawiesić komórki w pożywce i ułożyć je na płytce wielodołkowej pokrytej matrycą podstawową. Inkubuj, promując adhezję komórek.

Regularnie zmieniaj media.

Komórki śródbłonka tworzą monowarstwę i wspomagają wzrost perycytów.

Późniejsze pasażowanie komórek w pożywce perycytowej na pokrytej żelatyną płytce wielodołkowej wspomaga wzrost perycytów, jednocześnie eliminując komórki śródbłonka.

Zacznij od umieszczenia mózgu specyficznego, wolnego od patogenów cztero- do sześciotygodniowego samca myszy C57 black 6 na sterylnej, suchej, niestrzępiącej się chusteczce i za pomocą kleszczy z zakrzywion