Uzyskiwanie zawiesiny jednokomórkowej z tkanki hipokampa myszy
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:42 min. • July 8th, 2025
Weź perfundowane fragmenty hipokampa dorosłej myszy w probówce dysocjacyjnej zawierającej papainę i DNazę.
Umieść rurkę na dysocjatorze mechanicznym.
Dysocjator mechanicznie dezintegruje tkankę, rozluźniając komórki, w tym neurony i komórki glejowe.
Papaina rozbija macierz zewnątrzkomórkową tkanki, uwalniając komórki. DNaza degraduje zanieczyszczające DNA.
Dodać bufor zawierający BSA, inaktywując enzymy.
Przepuść zawiesinę przez sitko, aby usunąć duże zanieczyszczenia.
Odwirować filtrat. Odrzucić supernatant bogaty w enzymy.
Ponownie zawiesić komórki w buforze i przenieść je do świeżej probówki.
Dodaj podłoże gradientu gęstości, wymieszaj i pokryj mieszaninę buforem.
Podczas wirowania komórki i szczątki tworzą oddzielne warstwy w zależności od ich gęstości.
Usuń najwyższą warstwę buforową i środkową warstwę gruzu.
Dodaj bufor do dolnej warstwy zawierającej komórki i wymieszaj. Odwirować i odrzucić supernatant zawierający pożywkę o gradiencie gęstości.
Ponownie zawiesić komórki hipokampa w buforze w celu dalszej analizy.
Za pomocą kleszczy przenieś kawałki tkanki hipokampa do rurki C i dodaj 30 mikrolitrów mieszanki enzymów 2 do probówki. Po przekręceniu nakrętki i dokręceniu aż do
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych