JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:12 min • July 8th, 2025
W odpowiedzi na bodźce zewnętrzne nerwowe komórki macierzyste mózgu Drosophila (NSC) wychodzą ze stanu spoczynku, stanu zatrzymania cyklu komórkowego, i reaktywują się, aby rozpocząć proliferację.
Weźmy świeżo wyklute larwy Drosophila, etap, w którym NSC naturalnie wychodzą ze stanu spoczynku in vivo.
Chwyć haczyki do ust i ciało, aby rozłupać larwę.
Zlokalizuj mózg za haczykami do ust i wytnij go.
Przenieś mózgi do dołków na płytkach hodowlanych zawierających pożywki.
W studzienkach poddanych działaniu substancji pożywka zawiera hormon testowy, podczas gdy w studzienkach kontrolnych brakuje tego hormonu. Inkubować.
W warunkach kontrolnych NSC pozostają w stanie spoczynku z powodu braku bodźców zewnętrznych.
W studzienkach poddanych działaniu substancji hormon wiąże się ze specyficznymi receptorami NSC, aktywując dalsze szlaki sygnałowe i reaktywując NSC.
Reaktywowane NSC wchodzą w cykl komórkowy i ulegają proliferacji.
Po inkubacji mózgi są teraz gotowe do dalszej analizy w celu wizualizacji proliferacji NSC, potwierdzając potencjał reaktywacji hormonu.
Wypreparuj mózgi z larw umieszczonych w drugim szklanym naczyniu zegarkowym za pomocą SSM, używając kleszczy pod mikroskopem preparacyjnym i dostosowując powiększenie w razie potrzeby. Użyj jednego kleszczyka, aby chwycić haczyki do ust, a drugim delikatnie chwyć ciało do połowy w dół i pociągnij w przeciwnym kierunku, aby podzielić larwę na dwie części. Po wypreparowaniu od 15 do 20 mózgów dodaj 1 mililitr SSM do jednego dołka sterylnej 24-dołkowej tacki hodowlanej. Za pomocą mikropipety i sterylnej końcówki przenieś świeżo wypreparowane mózgi do SSM, a następnie kontynuuj inkubację pożywki z mózgami przez 24 godziny w temperaturze 25 stopni Celsjusza.