Przygotowanie mikrowzoru podłoża do badania fenotypów komórek Schwanna

Weź płytkę krzemową z mikrowzorami o pożądanej geometrii, aby wyhodować komórki w określonym kształcie.

Wlej na niego mieszaninę polimerów i pozwól mu zastygnąć.

Wytnij kwadratowy stempel polimeru.

Pokryj wzorzystą powierzchnię stempla warstwą białka, która ułatwia przyczepianie komórek.

Za pomocą strumienia powietrza usuń niezwiązane białka.

Weź szkiełko nakrywkowe pokryte polimerem.

Umieść na nim wzorzystą stronę stempla.

Naciśnij stempel, aby przenieść wzór. Usuń stempel.

Przenieś szkiełko nakrywkowe do studzienki zawierającej środek powierzchniowo czynny w celu pokrycia gołych powierzchni. Zwiększa to hydrofobowość powierzchni, zapobiegając niepożądanej adhezji komórek.

Usunąć środek powierzchniowo czynny i przemyć buforem fosforanowym.

Dodaj komórki Schwanna i pozwól im przyczepić się do mikrowzoru.

Umyj buforem, aby usunąć nieprzyłączone komórki.

Dodaj pożywkę hodowlaną i inkubuj.

Gdy komórki rosną wzdłuż powierzchni, przyjmują kształt mikrowzoru, umożliwiając badanie fenotypu komórek Schwanna.

Aby przygotować podłoże z mikrowzorem, umieść wzorzystą płytkę krzemową w okrągłej szalce Petriego o średnicy 150 milimetrów i wysokości 15 milimetrów i wlej odgazowany PDMS na płytkę.