Izolacja komórek Schwanna z korzeni rdzeniowych myszy

Weź korzeń nerwowy i posiekaj go na małe kawałki.

Przenieść do rurki zawierającej enzymy trawienne i inkubować.

Enzym trawi macierz zewnątrzkomórkową.

Dodaj pożywkę zawierającą surowicę, aby zatrzymać trawienie.

Kilkakrotnie odpipetować zawartość, a następnie odwirować i wyrzucić supernatant.

Ponownie zawiesić pellet.

Przepuścić zawiesinę przez sitko w celu usunięcia niestrawionej tkanki. Inkubuj zebrane komórki na płytce.

Fibroblasty i komórki Schwanna lub SC przyczepiają się do płytki i dzielą się.

Usuń niedołączone komórki. Umyj przyłączone komórki buforem fosforanowym.

Dodaj enzymy trawienne, aby rozluźnić wrażliwe na trawienie SC. Przerwij trawienie za pomocą pożywki.

Całkowicie odłącz SC, dodając nośnik.

Przenieś komórki do probówki i odwiruj. Odrzucić supernatant i ponownie zawiesić komórki w pożywce specyficznej dla SC.

Przenieść komórki na niepowlekaną płytkę i inkubować.

Wszelkie pozostałe fibroblasty będą przylegać, pozostawiając SC w zawiesinie.

Przenieść zawiesinę na płytkę pokrytą matrycą.

Inkubować w celu przyczepienia i podziału komórek Schwanna.

Pokrój nerwy nożyczkami na 3 do 5 milimetrowych kawałków. Dodaj 1 mililitr 0,25% trypsyny i przenieś kawałki nerwowe do 5