Znakowanie markerów powierzchni komórek nerwowych za pomocą azydocukru podczas wspólnej hodowli z komórkami śródbłonka

Zacznij od dodania zawiesiny komórek śródbłonka mózgu myszy do przepuszczalnej wkładki membranowej płytki transwell.

Dodaj pożywkę wzrostową do dna i inkubuj.

Czynniki wzrostu i składniki odżywcze w pożywce pomagają komórkom rosnąć jako monowarstwa.

Usuń podłoże z dolnej studzienki i z wkładu.

Umyj wewnętrzną i zewnętrzną powierzchnię wkładu, aby usunąć wszelkie zanieczyszczenia.

Dodaj adherentną pożywkę do wkładki i przenieś ją do studzienki pokrytej matrycą, zawierającej pierwotne korowe nerwowe komórki pnia i progenitorowe lub NSPC, a następnie inkubuj.

Dodaj azydocukier, nienaturalny analog prekursora kwasu sjalowego, zarówno do komórek śródbłonka, jak i NSPC i inkubuj.

Cytokiny i chemokiny wydzielane przez komórki śródbłonka sprzyjają wzrostowi NSPC w duże klony przypominające arkusze.

Azydocukry integrują się ze strukturami sialoglikanu na powierzchni komórki NSPC, znakując glikoproteinę. Umożliwia to identyfikację białek powierzchniowych komórek na ekspandowanych NSPC.

Aby przygotować komórki śródbłonka, ponownie zawieś osad komórek BEND3 z 0,10-centymetrowej szalki Petriego w 90% zbiegu z 9 mililitrami pożywki komórkowej BEND3. Dodaj 1 mililitr zawiesiny ogniw do jednej prz