JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:19 min. • July 8th, 2025
Weź zawiesinę komórek i szczątków z enzymatycznie trawionych włókien nerwowych kulszowych myszy.
Przepuść przez sitko, usuwając zanieczyszczenia.
Odwirować filtrat i usunąć sklarowany nad osadem.
Ponownie zawiesić komórki w pożywce zawierającej surowicę i umieścić je na płytce hodowlanej pokrytej białkiem adhezyjnym.
Inkubować w celu adhezji komórek. Zastąp nośnik nośnikiem komórkowym Schwanna. Inkubować w celu wytworzenia monowarstwy komórek Schwanna.
Usuń podłoże i umyj je buforem. Inkubuj z trypsyną, aby odłączyć komórki.
Dodaj pożywkę zawierającą surowicę, aby zatrzymać aktywność enzymatyczną.
Zebrać komórki i odwirować. Odrzucić supernatant.
Ponownie zawiesić komórki w buforze i dodać mikrokulki magnetyczne pokryte przeciwciałami.
Inkubować w celu związania przeciwciał z glikoproteinami fibroblastów.
Odwirować i wyrzucić supernatant. Ponownie zawiesić ogniwa w buforze i załadować je do kolumny separacji magnetycznej zawierającej kule ferromagnetyczne umieszczone w polu magnetycznym separatora magnetycznego.
Pole magnetyczne zatrzymuje fibroblasty związane z mikrokulkami, umożliwiając gromadzenie komórek Schwanna w przepływie.
Przenieś strawione nerwy do 50-mililitrowej probówk
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych