JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:32 min • July 8th, 2025
Weźmy mózg myszy zanurzony w lodowatym buforze.
Usuń móżdżek i przytnij przedni odcinek zawierający przyśrodkową korę przedczołową lub mPFC.
Przymocuj tkankę do ustawionego pod kątem bloku agaru, który jest przyklejony do stolika na próbkę wibratomową.
Przymocuj dodatkowe bloki agaru, aby zapewnić stabilność podczas krojenia. Umieść stolik w komorze cięcia wibratomu wypełnionej natlenionym, lodowatym buforem.
Generuj pochylone wycinki zawierające ciało migdałowate, które reagują na bodźce strachu i projekcje neuronalne z mPFC, które tworzą połączenia synaptyczne w ciele migdałowatym i regulują jego aktywność.
Nachylone warstwy odsłaniają projekcje, umożliwiając badanie funkcjonalnej łączności między mPFC a ciałem migdałowatym.
Pokrój plastry na pół i umieść je w komorze zawierającej natleniony sztuczny płyn mózgowo-rdzeniowy o temperaturze pokojowej, aby ustabilizować tkankę.
Inkubować plastry w temperaturze fizjologicznej, aby odzyskać tkankę do dalszych testów.
Użyj skalpela, aby odciąć móżdżek. Następnie wyizoluj przednią część mózgu zawierającą przyśrodkową korę przedczołową. Napełnij komorę cięcia lodowatym roztworem do cięcia utrzymywanym w temperaturze 4 stopni Celsjusza za pomocą jednostki chłodzącej. Natlenić roztwór.
Osusz mózg bibułą filtracyjną. Przyklej 4% blok agaru, który został przecięty pod kątem 35 stopni, do etapu wibracyjnego i przyklej tylną część tkanki mózgowej do tego bloku. Przyklej dwa dodatkowe bloki agaru przed i za blokiem mózgu, aby zapewnić stabilność podczas krojenia.
Umieść stolik z przymocowaną tkanką w komorze tnącej i upewnij się, że jest zanurzony. Zacznij kroić ostre plastry. Przekrój każdy plasterek na pół i przenieś do komory interfejsu zasilanej natlenionym ACSF w temperaturze pokojowej. Po przecięciu ostrych wycinków ciała migdałowatego umieść komorę interfejsu w łaźni wodnej o temperaturze 36 stopni Celsjusza i pozwól plastrom zregenerować się przez 35 do 45 minut.