JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:43 min. • July 8th, 2025
Weź zakręt zębaty z mózgu myszy w zimnym buforze homogenizacyjnym
.Mechanicznie dysocjuj w celu uwolnienia neuronów, komórek glejowych i macierzystych.
Łagodny detergent zawarty w buforze przenika do komórek, uwalniając jądra i inne organelle.
Przefiltruj homogenat, aby usunąć resztki tkanek. Następnie odwirować, usunąć organelle i ponownie zawieś w buforze homogenizacyjnym w celu lizy nienaruszonych komórek.
Ponownie odwirować, usunąć supernatant zawierający uwolnione organelle i ponownie zawiesić jądra w buforze do płukania.
Przefiltrować, aby usunąć wszelkie zanieczyszczenia, odwirować i usunąć supernatant.
Wprowadź fluorescencyjne barwienie DNA, aby oznaczyć wszystkie jądra i przeciwciało sprzężone z fluoroforem, które wiąże się z neuronalnym antygenem jądrowym lub NeuN, znakując jądra neuronów.
Korzystając z sortowania jąder aktywowanych fluorescencją, zidentyfikuj agregaty o wyższej intensywności fluorescencji barwienia DNA i wyższych właściwościach rozpraszania, oddzielając pojedyncze jądra.
Przeanalizuj pojedyncze jądra, oddzielając jądra neuronalne NeuN-dodatnie i izolując jądra NeuN-ujemne należące do komórek glejowych i macierzystych.
Homogenizować tkankę za pomocą 10 po
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych