Izolowanie komórek odpornościowych z mysich splotów naczyniówkowych

Ustaw mózg myszy grzbietową stroną do góry.

Pod mikroskopem oddziel półkule mózgowe. Odciągnij korę, a następnie hipokamp, aby odsłonić komory boczne i trzecią komorę.

Zbierz dwa boczne sploty naczyniówkowe. Są to struktury mózgu bogate w komórki odpornościowe, które wyściełają boczne komory jak długa zasłona.

Zbierz splot naczyniówkowy trzeciej komory, który jest krótką strukturą o ziarnistej powierzchni.

Odłącz móżdżek, aby odsłonić czwartą komorę.

Zbierz splot naczyniówkowy czwartej komory, który jest długą kulistą strukturą o ziarnistej powierzchni.

Umieść wszystkie sploty naczyniówkowe w probówce z buforowaną solą fizjologiczną, aby zachować integralność tkanek.

Dodaj roztwór enzymu trawiennego i inkubuj z mieszaniem.

Enzym rozkłada macierz zewnątrzkomórkową i rozluźnia komórki.

Dodać odpowiedni bufor, aby dezaktywować enzym.

Odwirować, aby osadzić komórki. Odrzucić supernatant i ponownie zawiesić komórki w nowym buforze do dalszej analizy.

Na początek umieść mózg wypreparowany grzbietową stroną grzbietową myszy C57 Black 6 do góry na szalce Petriego i umieść szalkę poniżej celów lup lornetkowych. Utrzymując mózg na miejscu za pomocą kleszczy, włóż dwa końce innej pary kleszcz