JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:13 min • July 8th, 2025
Ustaw mózg myszy grzbietową stroną do góry.
Pod mikroskopem oddziel półkule mózgowe. Odciągnij korę, a następnie hipokamp, aby odsłonić komory boczne i trzecią komorę.
Zbierz dwa boczne sploty naczyniówkowe. Są to struktury mózgu bogate w komórki odpornościowe, które wyściełają boczne komory jak długa zasłona.
Zbierz splot naczyniówkowy trzeciej komory, który jest krótką strukturą o ziarnistej powierzchni.
Odłącz móżdżek, aby odsłonić czwartą komorę.
Zbierz splot naczyniówkowy czwartej komory, który jest długą kulistą strukturą o ziarnistej powierzchni.
Umieść wszystkie sploty naczyniówkowe w probówce z buforowaną solą fizjologiczną, aby zachować integralność tkanek.
Dodaj roztwór enzymu trawiennego i inkubuj z mieszaniem.
Enzym rozkłada macierz zewnątrzkomórkową i rozluźnia komórki.
Dodać odpowiedni bufor, aby dezaktywować enzym.
Odwirować, aby osadzić komórki. Odrzucić supernatant i ponownie zawiesić komórki w nowym buforze do dalszej analizy.
Na początek umieść mózg wypreparowany grzbietową stroną grzbietową myszy C57 Black 6 do góry na szalce Petriego i umieść szalkę poniżej celów lup lornetkowych. Utrzymując mózg na miejscu za pomocą kleszczy, włóż dwa końce innej pary kleszczy w dół przez linię środkową między półkulami.
Za pomocą kleszczy odciągnij korę z modzelem i hipokampem od przegrody, odsłaniając komorę boczną i część trzeciej komory. Zidentyfikuj boczny splot naczyniówkowy jako długą zasłonę wyściełającą komorę boczną i rozszerzającą się na obu końcach. Następnie za pomocą dwóch końców cienkich kleszczy zbierz boczny splot naczyniówkowy. Uważaj, aby zebrać trójkątną tylną część ukrytą przez tylny fałd hipokampa.
Następnie odciągnij korę z ciałem modzelowatym i hipokampem przeciwległej półkuli od przegrody, aby odsłonić całą trzecią komorę i przeciwległą komorę boczną. Za pomocą cienkich kleszczyków zbierz trzeci splot naczyniówkowy zidentyfikowany jako krótka struktura o ziarnistym wyglądzie powierzchni. Następnie zbierz drugi boczny splot naczyniówkowy.
Następnie włóż dwa końce kleszczy między móżdżek a śródmózgowie i odłącz móżdżek od mostu i rdzenia, aby odsłonić czwartą komorę. Następnie zidentyfikuj czwarty splot naczyniówkowy jako długą, kulistą strukturę o ziarnistym aspekcie powierzchni, która wyściela czwartą komorę od bocznego prawego końca do lewego końca między móżdżkiem a rdzeniem. Za pomocą cienkich kleszczy zbierz czwarty splot naczyniówkowy.
Po inkubacji wszystkich zebranych splotów naczyniówkowych z kolagenazą dożylną, delikatnie pipetuj w górę iw dół około 10 razy, aby sfinalizować dysocjację. Następnie napełnij probówkę do 1,5 mililitra buforem MACS, aby zatrzymać aktywność kolagenazy dożylnej. Następnie odwirować komórki i wyrzucić supernatant przed umyciem komórek 1,5 mililitra buforu MACS. Po dodaniu odpowiednich kulek kompensacyjnych i roztworów przeciwciał próbki należy inkubować na lodzie przez 30 do 45 minut, chroniąc je przed ekspozycją na światło. Następnie napełnij probówki 1,5 mililitra buforu MACS.
Niniejszy artykuł szczegółowo opisuje metodę izolacji tkanek splotów naczyniowych z mózgów myszy, ze szczególnym uwzględnieniem komór bocznych oraz czwartej komory. Procedura obejmuje dyssekcję, obróbkę enzymatyczną oraz resuspensję komórek w celu przeprowadzenia dalszych analiz.
Izolowanie komórek odpornościowych z splotów naczyniowych myszy umożliwia precyzyjne badanie oddziaływań neuroimmunologicznych istotnych dla modeli chorób OUN. Możliwość ta wspiera wczesny etap walidacji celów terapeutycznych oraz ograniczanie ryzyka mechanistycznego w procesie odkrywania leków na stany zapalne i procesy neurodegeneracyjne. Metoda ta stanowi podstawę dla powtarzalnej i ilościowej analizy komórek odpornościowych w istotnych dla przebiegu chorób obszarach mózgu.
Niniejszy protokół izolacji komórek odpornościowych znajduje zastosowanie na etapie przejścia od wczesnych odkryć do badań przedklinicznych, umożliwiając prowadzenie studiów mechanistycznych oraz opracowywanie testów dla programów skierowanych na ośrodkowy układ nerwowy (CNS).
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Ostatnia aktualizacja: 29 sierpnia 2026