Uzyskiwanie mieszanej hodowli komórek glejowych z mózgu noworodka myszy

Zacznij od mózgu nowonarodzonego myszy i przenieś go do probówki zawierającej roztwór enzymu proteolitycznego.

Enzymy degradują macierz zewnątrzkomórkową tkanki i inicjują dysocjację komórki.

Kilkakrotnie przemyj strawioną tkankę pożywką wzrostową, aby usunąć enzymy.

Użyj pipety o większej średnicy, aby wielokrotnie przesuwać tkankę przez pipetę, aby zdysocjować ją na mniejsze fragmenty.

Następnie, używając pipety o mniejszej średnicy, kontynuuj dysocjację fragmentów, tworząc zawiesinę komórek.

Przefiltruj tę zawiesinę, aby usunąć grudki komórek i uzyskać zawiesinę jednokomórkową zawierającą pierwotne neurony i mieszaną populację komórek glejowych, w tym mikrogleju i astrocytów.

Wysiewać komórki w kolbie hodowlanej zawierającej pożywkę wzrostową i inkubować, aby zwiększyć ich przyleganie.

Z biegiem czasu brak czynników wzrostu neuronów w pożywce powoduje śmierć neuronów.

Zastąp zużyte nośniki nowymi nośnikami. Komórki glejowe wykorzystują składniki odżywcze i namnażają się, tworząc mieszaną kulturę glejową astrocytów i mikrogleju.

Przenieś mózg do 50-mililitrowej probówki zawierającej 2 mililitry 0,25% trypsyny-EDTA i inkubuj przez 15 minut w łaźni wodnej o temperaturze 37 stopni C