JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 5:00 min. • July 8th, 2025
Weź perfundowane fragmenty hipokampa szczura.
Inkubuj z papainą, aby strawić macierz zewnątrzkomórkową tkanki i rozluźnić komórki, w tym neurony, astrocyty i mikroglej.
Dodaj DNazę i wymieszaj.
Mechanicznie zdysocjować tkankę za pomocą pipet o stopniowo zmniejszających się średnicach, aby uzyskać zawiesinę jednokomórkową. Inkubuj dla DNazy w celu degradacji zanieczyszczającego DNA.
Przepuść zawiesinę przez sitko, usuwając zanieczyszczenia.
Dodać bufor zawierający jony dwuwartościowe, aby zatrzymać aktywność enzymatyczną.
Odwirować i usunąć supernatant bogaty w enzymy.
Teraz dodaj bufor i kulki magnetyczne anty-mielinowe. Inkubuj, aby kulki związały resztki mieliny.
Po inkubacji odwirować i usunąć supernatant.
Zawiesić mieszaninę w buforze i załadować ją do kolumny separacji magnetycznej zawierającej kulki ferromagnetyczne umieszczone w polu magnetycznym sortera magnetycznego.
Pole magnetyczne zatrzymuje w kolumnie szczątki mieliny związane z kulkami magnetycznymi, podczas gdy komórki wolne od mieliny przechodzą przez nią.
Przemyć kolumnę buforem i zebrać przepływ zawierający neurony, astrocyty i mikroglej.
Rozpocznij dysocjację neuronalną za pomocą sterylnych żyletek, aby pokroić k
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych