JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 5:29 min. • July 8th, 2025
Zbierz rdzeń kręgowy myszy i pokrój je na fragmenty.
Przenieś fragmenty do probówki zawierającej enzym proteolityczny i DNazę. Wirować i inkubować.
Enzym trawi macierz zewnątrzkomórkową tkanki, podczas gdy DNaza degraduje zanieczyszczające wolne DNA.
Ponownie wirować i wielokrotnie pipetować, aby zakończyć dysocjację tkanek, uzyskując zawiesinę jednokomórkową.
Odwirować i usunąć supernatant. Ponownie zawiesić komórki w roztworze zawierającym DNazę i inhibitor proteazy i wirować. Inhibitor neutralizuje enzym.
Na wierzch nałożyć świeży roztwór inhibitora, odwirować i usunąć supernatant.
Ponownie zawiesić komórki w pożywce o gradiencie gęstości, wirować, a następnie odwirować.
Komórki osiadają na dole, podczas gdy resztki mieliny pozostają na górze.
Wyrzuć zanieczyszczenia. Kilkakrotnie przemyć buforem, odwirować i usunąć supernatant. Ponownie zawiesić komórki w pożywce wzrostowej.
Ułóż komórki na płytce. Niepowlekana powierzchnia ułatwia przyczepianie się komórek glejowych.
Usuń zużytą pożywkę i dodaj świeżą pożywkę, aby indukować proliferację komórek glejowych, tworząc mieszaną kulturę glejową.
Pracując w kapturze do hodowli tkankowej, przenieś cztery rdzenie kręgowe myszy na szalkę
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych