Różnicowanie komórek progenitorowych oty w komórki nabłonka czuciowego, a następnie barwienie immunologiczne
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:55 min. • July 8th, 2025
Hodowla unieśmiertelniła multipotencjalne komórki progenitorowe (iMOP) w pożywce.
Czynniki wzrostu zawarte w pożywkach ułatwiają proliferację iMOP i tworzenie kolonii, tworząc otosfery.
Zbierz otosfery i pozwól im osiąść grawitacyjnie.
Usuń pożywkę i dodaj pożywkę różnicującą pozbawioną czynników wzrostu. Ułóż otosfery na płytce.
Brak czynników wzrostu inicjuje różnicowanie iMOP w komórki nabłonka czuciowego.
Zbierz zróżnicowane otosfery i pozwól im się uspokoić.
Usuń pożywkę i dodaj utrwalacz, aby zachować morfologię komórkową.
Następnie dodaj detergent, aby przepuszczalnie błony komórkowe i jądrowe.
Dodaj bufor blokujący, aby zapobiec wiązaniu się przeciwciał nieswoistych.
Wprowadź przeciwciała pierwszorzędowe ukierunkowane na określony marker różnicowania.
Dodaj sprzężone z fluoroforem przeciwciała drugorzędowe skierowane przeciwko przeciwciałom pierwszorzędowym, znakowaną fluorescencyjnie falloidynę do barwienia aktyny i barwnik wiążący DNA do barwienia jąder.
Zamontuj otosfery.
Za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej zwizualizuj barwienie, aby potwierdzić różnicowanie iMOP.
Trzy dni po posiewie użyj sedymentacji grawitacyjnej, aby zebrać otosfery, jak pokazano wcześniej. Przyst
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych