Różnicowanie unieśmiertelnionych multipotencjalnych progenitorów otycznych w neurony zwojowe spiralne i ocena różnicowania
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 5:14 min. • July 8th, 2025
Pobrać płytkę wielodołkową zawierającą sterylne szkiełka nakrywkowe pokryte substratem do hodowli komórkowych.
Wprowadź unieśmiertelnione multipotencjalne komórki progenitorowe lub iMOP w pożywce różnicowania neuronów.
iMOPy są prekursorami różnych komórek ucha wewnętrznego, w tym neuronów spiralnych zwojowych (SGN), które przekazują informacje słuchowe do mózgu.
Inkubować, pozwalając komórkom przylegać do substratu. Pożywka indukuje różnicowanie iMOPów w SGN.
Dodaj utrwalacz, aby indukować sieciowanie białek, zachowując morfologię komórek, oraz roztwór detergentu, aby przepuszczalnie błony komórkowe.
Wprowadzić odczynnik blokujący, aby zapobiec niespecyficznemu etykietowaniu.
Dodać przeciwciała sprzężone z fluoroforem specyficzne dla markerów różnicowania neuronów i inkubować, umożliwiając przeciwciałom znakowanie SGN.
Przemyć w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał i zamocować szkiełka nakrywkowe za pomocą podłoża mocującego zawierającego fluorescencyjne barwienie jądrowe.
Za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej wykryj sygnały przeciwciał, aby potwierdzić różnicowanie iMOPs w SGN.
Najpierw wyczyść okrągłe szklane szkiełka nakrywkowe, umieszczając je na sterylnej 100-milimetrowe
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych