Hodowla ex vivo i obrazowanie wycinków okoruchowych z transgenicznych zarodków myszy
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:29 min. • July 8th, 2025
Weź transgeniczną ciężarną mysz, chirurgicznie odizoluj macicę zawierającą zarodki i umyj ją, aby usunąć resztki krwi.
Usuń zarodki zawierające znakowane fluorescencyjnie neurony ruchowe i przenieś je na pokrywę płytki wielodołkowej.
Dodaj stopioną agarozę i ostudź pokrywkę, aby wywołać tworzenie się żelu, osadzając zarodki.
Pod mikroskopem fluorescencyjnym ustaw jądra okoruchowe i oczy w linii i przytnij agarozę równolegle do linii.
Utrwal zarodek na etapie próbki i umieść go w komorze wibratomu wypełnionej zimnym buforem do krojenia.
Za pomocą wibratomu wygeneruj plasterki zawierające jądra okoruchowe i oczy. Jądra tworzą nerwy okoruchowe, które kontrolują ruch gałek ocznych.
Przenieść plastry na wkładki hodowlane wewnątrz płytki wielodołkowej zawierającej pożywkę hodowlaną i inkubować.
Używając mikroskopu fluorescencyjnego, wykonuj obraz w regularnych odstępach czasu, aby obserwować znakowane fluorescencyjnie neurony okoruchowe rozciągające aksony, aby dotrzeć do oczu.
Przed rozpoczęciem zabiegu należy najpierw potwierdzić ciążę za pomocą USG w 10,5 dniu zarodka od krycia czasowego. Zbierz zarodki, spryskaj brzuch ciężarnej myszy 70% etanolem i użyj nożyczek, aby otworzyć jamę b
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych