Izolowanie mysich komórek zwojowych siatkówki za pomocą sortowania komórek aktywowanych fluorescencją
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:10 min. • July 8th, 2025
Umieść mysią siatkówkę na zwilżonym sitku do komórek i maceruj okrężnymi ruchami, aby oddzielić komórki siatkówki od macierzy zewnątrzkomórkowej.
Przenieś sitko do probówki zbiorczej.
Dodaj bufor fosforanowy i roztwór surowicy do sitka, aby przepłukać i zebrać komórki.
Odwirować, aby osadzić komórki. Odrzucić supernatant i ponownie zawiesić komórki w buforze fosforanowym i roztworze surowicy.
Dodaj przeciwciała blokujące, które wiążą się z receptorami Fc na komórkach, zapobiegając niespecyficznemu wiązaniu przeciwciał docelowych.
Następnie dodaj fluorescencyjnie znakowane i nieznakowane przeciwciała pierwszorzędowe, które wiążą się z określonymi markerami powierzchni komórek na różnych typach komórek.
Umyć w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał.
Dodaj fluorescencyjnie znakowane przeciwciało drugorzędowe, aby związać się z nieoznakowanym przeciwciałem pierwszorzędowym.
Umyć w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał.
Wykonaj sortowanie komórek aktywowane fluorescencją lub FACS, aby uchwycić wyraźne sygnały fluorescencyjne znakowanych komórek i posortować komórki zwojowe siatkówki z różnych populacji komórek siatkówki.
Umieść do 12 siatkówek na sterylnym nylonowym sitku o grubośc
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych