JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:15 min. • July 8th, 2025
Zacznij od płytki wielodołkowej zawierającej indukowane przez człowieka pluripotencjalne komórki macierzyste lub iPSC w pożywce z inhibitorem kinazy Rho, który wspomaga przeżycie komórek.
Zastąp pożywkę niezbędną pożywką zawierającą składniki odżywcze i czynniki wzrostu.
Inkubować, aby umożliwić proliferację i różnicowanie iPSC w komórki prekursorowe.
Zastąp tę pożywkę pożywką różnicującą uzupełnioną czynnikami wzrostu fibroblastów i kwasem retinowym, a następnie inkubuj.
Czynniki wzrostu ułatwiają różnicowanie komórek prekursorowych w mikronaczyniowe komórki śródbłonka, podczas gdy kwas retinowy sprzyja syntezie białek połączeń ścisłych.
Umyj i potraktuj komórki roztworem enzymu-EDTA, aby odłączyć komórki, tworząc zawiesinę jednokomórkową.
Odwirować w celu zebrania komórek i usunięcia supernatantu. Następnie ponownie zawieś komórki w świeżej pożywce różnicowej.
Zasiaj tę zawiesinę komórkową w wielodołkowej płytce pokrytej kolagenem i białkami adhezyjnymi.
Inkubuj, aby umożliwić adhezję komórek, tworząc ścisłe połączenia między komórkami, przypominające komórki śródbłonka mikronaczyniowego mózgu.
Aby indukować różnicowanie BMEC od ludzkich iPSC, należy przemyć zlewającą się kulturę
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych