Generowanie wycinków kory przyśrodkowej wzgórza i przedniej ręki z mózgów myszy

Zacznij od odciętej głowy myszy. Usuń skórę, aby odsłonić czaszkę, i otwórz czaszkę, aby uzyskać dostęp do mózgu.

Usuń opuszki węchowe i odetnij wszelkie połączenia nerwowe, aby wydobyć mózg do lodowato natlenionego sztucznego płynu mózgowo-rdzeniowego lub aCSF.

Weź mózg i wykonaj dwa pionowe nacięcia na każdej połowie, aby odsłonić wewnętrzną anatomię.

Wykonaj dwa cięcia pod kątem, aby wyizolować obszar zawierający przyśrodkowe wzgórze-przednią korę zakrętu obręczy lub szlak MT-ACC. MT, część wzgórza, działa jako stacja przekaźnikowa poprzez projekcje neuronalne rozciągające się do ACC w korze czołowej.

Przymocuj mózg do ustawionej pod kątem płytki za pomocą kleju, wykonaj nacięcie, aby rozłożyć mózg i odsłonić ścieżkę, a następnie przymocuj go do stolika na próbkę wibratomu.

Umieść stolik w wibratomie, dodaj bufor i wygeneruj plasterki zawierające ścieżkę MT-ACC.

Utrzymuj plastry mózgu w ciągłym przepływie natlenionego aCSF, aby utrzymać ich żywotność.

Odsłoń czaszkę zwierzęcia i odetnij pozostały mięsień. Następnie oderwij grzbietową powierzchnię czaszki za pomocą rongeurs i odetnij boki. Następnie za pomocą szpatułki przetnij opuszki węchowe i połączenia nerwowe wzdłuż brzusznej powierzchni mózgu przed jego usunięciem.

Szybko przenieś mózg do zlewki wypełnionej lodowato natlenionym ACSF. Aby przygotować wycinki zawierające szlak MT-ACC, wykonaj strzałkowe cięcie 2 milimetry w bok do linii środkowej w każdej półkuli, aby wyświetlić anatomię podkorową.

Następnie wykonaj kątowe cięcie poprzeczne równolegle do widocznego przewodu światłowodowego w prążkowiu. Wykonaj drugi kątowy przekrój poprzeczny od połączenia między móżdżkiem a korą wzrokową do punktu środkowego między spoidłem przednim a drogami wzrokowymi, które są brzuszne i równoległe do szlaku zakrętu obręczy wzgórza. Następnie przymocuj blok mózgu do kanciastej płytki za pomocą kleju cyjanoakrylowego.

Wykonaj cięcie tuż nad punktem zwrotnym ścieżki. Następnie rozłóż płytkę, spłaszcz ją i przyklej do stopnia komorowego wibratomu. Następnie pokrój plastry mózgu o grubości 500 mikrometrów i trzymaj je w lodowato natlenionym ACSF. Przenieść plasterek do komory rejestracyjnej w temperaturze 32 stopni Celsjusza z ciągłą perfuzją natlenionego ACSF przez jedną godzinę.