Izolacja i hodowla komórek z zarodka myszy Grzbietowo-boczne kresomózgowie

Weź zarodek myszy w buforze i oddziel czaszkę, aby wyizolować mózg.

Usuń opony mózgowe, błoniastą warstwę pokrywającą mózg.

Przeprowadź sekcję mózgu, aby oddzielić półkule.

Odizoluj grzbietowo-boczne kresomózgowie od półkul i przenieś je do rurki.

Grzbietowo-boczne kresomózgowie jest bogate w neurony i nerwowe komórki progenitorowe.

Odwirować i usunąć supernatant.

Dodaj roztwór enzymu. Enzymy rozkładają macierz tkankową, rozluźniając komórki.

Wprowadzić pożywkę proliferacyjną zawierającą surowicę. Białka surowicy hamują aktywność enzymów.

Użyj pipety, aby mechanicznie zdysocjować tkankę, tworząc zawiesinę komórkową.

Odwirować i usunąć sklarowany szwaczek zawierający inaktywowane enzymy i resztki tkanek.

Ponownie zawiesić komórki w pożywce proliferacyjnej.

Przenieść komórki na mikropłytkę pokrytą substratem do hodowli komórkowej.

Inkubuj, aby komórki przylegały do podłoża. Pożywka ułatwia proliferację komórek progenitorowych.

Zacznij od usunięcia mózgów z 5 do 10 zarodków E14 na szalce Petriego z zimnym podłożem preparacyjnym. Użyj kleszczy, aby ostrożnie wyciągnąć skórę i czaszkę oraz odizolować mózgi. Podczas pracy pod mikroskopem stereoskopowym użyj kleszczy preparacyjnych, aby u