Izolacja i hodowla komórek z zarodka myszy Grzbietowo-boczne kresomózgowie

0 wyświetleń4:47 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Weź zarodek myszy w buforze i oddziel czaszkę, aby wyizolować mózg.

Usuń opony mózgowe, błoniastą warstwę pokrywającą mózg.

Przeprowadź sekcję mózgu, aby oddzielić półkule.

Odizoluj grzbietowo-boczne kresomózgowie od półkul i przenieś je do rurki.

Grzbietowo-boczne kresomózgowie jest bogate w neurony i nerwowe komórki progenitorowe.

Odwirować i usunąć supernatant.

Dodaj roztwór enzymu. Enzymy rozkładają macierz tkankową, rozluźniając komórki.

Wprowadzić pożywkę proliferacyjną zawierającą surowicę. Białka surowicy hamują aktywność enzymów.

Użyj pipety, aby mechanicznie zdysocjować tkankę, tworząc zawiesinę komórkową.

Odwirować i usunąć sklarowany szwaczek zawierający inaktywowane enzymy i resztki tkanek.

Ponownie zawiesić komórki w pożywce proliferacyjnej.

Przenieść komórki na mikropłytkę pokrytą substratem do hodowli komórkowej.

Inkubuj, aby komórki przylegały do podłoża. Pożywka ułatwia proliferację komórek progenitorowych.

Zacznij od usunięcia mózgów z 5 do 10 zarodków E14 na szalce Petriego z zimnym podłożem preparacyjnym. Użyj kleszczy, aby ostrożnie wyciągnąć skórę i czaszkę oraz odizolować mózgi. Podczas pracy pod mikroskopem stereoskopowym użyj kleszczy preparacyjnych, aby usunąć opony mózgowe. Następnie podziel kresomózgowie pośrodku, aby oddzielić półkule.

Aby wyizolować grzbietowo-boczną kresomózgowie, przeciąć wzdłuż krzywej grzbietowo-przyśrodkowej i granicy palijalno-podpalialnej. Przenieś grzbietowo-boczną kresomózgowie do 2-mililitrowej rurki z podłożem preparacyjnym na lodzie, aż wszystkie mózgi zostaną wypreparowane. Po mikrodysekcji grzbietowo-bocznej kresomózgowia umieść tkankę w stożkowej rurce o pojemności 15 mililitrów.

Następnie odwirować probówkę zawierającą zebraną tkankę i zimną pożywkę preparacyjną przez 5 minut w temperaturze 4 stopni Celsjusza i 340 razy g, aby wytrącić tkankę. Po wirowaniu usuń supernatant za pomocą pipety i dodaj 1 mililitr 37 stopni Celsjusza 0,05% trypsyny-EDTA do trawienia chemicznego. Inkubować przez 15 minut w temperaturze 37 stopni Celsjusza.

Po inkubacji dodaj 2 mililitry pożywki proliferacyjnej, aby zahamować aktywność trypsyny. Następnie wypoleruj końcówkę szklanej pipety Pasteura nad palnikiem gazowym lub palnikiem Bunsena przez kilka sekund, aby nieznacznie zwęzić otwór. Odessać FCS, aby pokryć końcówkę pipety. Następnie mechanicznie oddzielić komórki za pomocą wypolerowanej ogniowo i pokrytej FCS pipety Pasteura, pipetując w górę i w dół, uważając, aby uniknąć generowania pęcherzyków.

Odwirować zdysocjowane komórki przez 5 minut w temperaturze 4 stopni Celsjusza i 340 razy g. Usunąć supernatant za pomocą pipety. Następnie dodaj 1 mililitr pożywki proliferacyjnej i ponownie zawieś komórki za pomocą pipety. Usunąć PBS z płytki poddanej wstępnej obróbce poli-D-lizyną. Następnie narysuj znak na spodzie tabliczki, który może służyć jako odniesienie do określenia punktu zerowego.

Po ponownym zawieszeniu komórek w pożywce proliferacyjnej, należy przygotować zawiesinę komórek w stosunku 1 do 1, używając 0,4% roztworu błękitu trypanowego. Załaduj do szkiełek komory liczącej i policz liczbę niebarwionych żywotnych komórek. Niezdolne do życia komórki będą niebieskie. Rozcieńczyć komórki w pożywce proliferacyjnej, aby uzyskać 106 komórek na mililitr. Dodaj 500 mikrolitrów zawiesiny komórkowej do każdego dołka 24-dołkowej płytki do hodowli tkankowej i inkubuj komórki w temperaturze 37 stopni Celsjusza i 5% dwutlenku węgla.

11:19

Uproszczona metoda długoterminowej hodowli pierwotnych neuronów hipokampa o bardzo niskiej gęstości

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:06

Mikrodysekcja mózgu myszy na funkcjonalnie i anatomicznie różne regiony

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

11:06

Potrójny pierwotny model hodowli komórkowej ludzkiej bariery krew-mózg do badania udaru niedokrwiennego in vitro

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:24

Izolacja eksplantów grzbietowej części przedmózgowia myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

27:44

Hodowla prekursorów neuronalnych komórek macierzystych myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:25

Izolacja i hodowla embrionalnych neuronów ruchowych myszy na podstawie lektyny

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:57

Izolacja i hodowla neuronów ruchowych okoruchowych, bloczkowych i rdzeniowych z zarodka myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

04:04

Izolacja i hodowla pierwotnych embrionalnych neuronów dopaminowych śródmózgowia myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

11:25

Izolacja i hodowla astrocytów korowych myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

12:02

Izolacja i hodowla komórek śródbłonka z zarodka przodomózgowia

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

Ostatnia aktualizacja: 15 sierpnia 2026