JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:18 min. • July 8th, 2025
Weź świeżo zebrany mózg szczeniaka szczura, grzbietową stroną do góry, na płytkę hodowlaną ze schłodzonym buforem.
Otwórz półkule mózgowe i usuń tkanki pokrywające hipokamp.
Naciąć półkule tak, aby zawierały hipokampy i korę nosa.
Umieść obie półkule hipokampem skierowanym do góry i równolegle na bibule filtracyjnej.
Przenieś ten zespół do rozdrabniacza tkanek z ostrzem prostopadłym do półkul.
Pokrój półkule na wymaganą grubość, aby uzyskać plastry i przenieś je na płytkę hodowlaną ze schłodzonym buforem.
Ostrożnie oddziel plastry i rozdziel je tak, aby zawierały strukturalnie nienaruszone obszary kory hipokampa i nosa.
Przenieść plastry do błoniastych wkładek na płytce wielodołkowej zawierającej pożywkę.
Usuń nadmiar buforu z plastrów i inkubuj je w celu odzyskania tkanek.
Odśwież nośnik. Plasterki można wykorzystać do dalszej analizy.
Przenieś mózg, grzbietową stroną do góry, na 60-milimetrową płytkę zawierającą 5 mililitrów zimnego GBSS. Włóż cienkie kleszcze do móżdżku i włóż szpatułkę wzdłuż linii środkowej, aby ostrożnie otworzyć półkulę. Użyj krótkich, zakrzywionych kleszczy, aby ostrożnie usunąć nadmiar tkanki pokrywającej hipokamp bez dotykania struktury hipokampa. Następnie przetnij poniżej każdego hipokampa.
Przenieś jedną półkulę po drugiej, hipokampem do góry i równolegle do siebie, na kawałek bibuły filtracyjnej. Umieść bibułę filtracyjną na rozdrabniaczu do tkanek z półkulami prostopadłymi do ostrza i pokrój półkule na plastry o grubości 350 mikronów. Przenieś pokrojoną tkankę na nową szalkę Petriego zawierającą 5 mililitrów zimnego GBSS i użyj elektrod z okrągłą końcówką, aby ostrożnie oddzielić plasterki.
Trzymając tylko próbki z nienaruszoną strukturalnie korą nosa i hipokampem, użyj szpatułki i elektrody z okrągłą końcówką, aby umieścić do czterech nienaruszonych plasterków na indywidualnych wkładkach w odpowiedniej liczbie dołków sześciodołkowej płytki zawierającej 1,1 mililitra pożywki hodowlanej na studzienkę.
Użyj pipety P20, aby usunąć nadmiar pożywki preparacyjnej z okolic każdej kromki. Umieścić płytkę w inkubatorze do hodowli komórkowych. Zmieniaj podłoże co dwa do trzech dni. Użyj kleszczy, aby podnieść wkładkę. Zassać pożywkę z odpowiedniej studzienki i umieścić wkładkę z powrotem na miejscu. Użyj pipety P1000, aby dodać 1 mililitr świeżej pożywki o temperaturze 37 stopni Celsjusza do każdego dołka.