JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:52 min. • July 8th, 2025
Zacznij od studzienki zawierającej nerwową komórkę progenitorową lub agregaty NPC w pożywce różnicującej-1 lub DM-1.
Te NPC są prekursorami linii neuronalnej generowanej z ludzkich indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych lub hiPSC przy użyciu DM-1 w kontrolowanych warunkach.
Przenieś agregaty NPC na wkład membranowy umieszczony w studzience zawierającej DM-1 i usuń nadmiar pożywki.
Zmień pożywkę na DM-2 i inkubuj.
DM-2 dostarcza składników odżywczych i czynników różnicujących, które sprzyjają dojrzewaniu NPC do różnych typów komórek nerwowych.
Niezróżnicowane NPC przekształcają się w ciała embrionalne, znane jako ciała embrionalne wolne od surowicy lub SFEB, ponieważ pożywka nie ma surowicy. Te EB przypominają morfologię rozwijającego się mózgu.
Przenieść wkładkę do studzienki zawierającej DM-3.
DM-3 zawiera czynniki wzrostu niezbędne do utrzymania i wzrostu SFEB.
Inkubować, aż SFEB osiągną pożądany rozmiar.
Po dwóch tygodniach hodowli komórek przygotuj sześciodołkowe płytki z 40-mikronowymi wkładkami do hodowli komórkowych i 1 mililitrem pożywki DM1. Inkubować te płytki przez co najmniej cztery godziny przed dodaniem hodowanych komórek.
Następnie, za pomocą końcówki
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych