Różnicowanie indukowanych przez człowieka pluripotencjalnych komórek macierzystych w funkcjonalne neurony ruchowe
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:29 min. • July 8th, 2025
Weźmy na przykład ludzkie indukowane pluripotencjalne komórki macierzyste (iPSC) hodowane na płytce pokrytej macierzą zewnątrzkomórkową.
iPSC są genetycznie modyfikowane w celu ekspresji czynników transkrypcyjnych, które indukują różnicowanie neuronów ruchowych.
Usuń pożywkę i dodaj enzymy, aby oderwać kolonie.
Mechanicznie zdysocjuj komórki w zawiesinę jednokomórkową i zbierz je.
Odwirować i usunąć supernatant.
Ponownie zawiesić komórki w pożywce zawierającej inhibitor, który zapobiega apoptozie komórkowej.
Ułóż komórki na naczyniu pokrytym matrycą.
Dodać świeże pożywki różnicujące zawierające antybiotyk doksycyklinę i inhibitory małocząsteczkowe.
Doksycyklina indukuje ekspresję czynnika transkrypcyjnego, podczas gdy inhibitory blokują specyficzne szlaki sygnałowe, promując różnicowanie iPSC do komórek progenitorowych neuronów ruchowych.
Dodaj enzymy, aby odłączyć komórki.
Zbierz komórki i mechanicznie je rozdziel.
Odwirować i wyrzucić supernatant. Ponownie zawiesić komórki w pożywkach neuronalnych.
Umieść komórki na mikroszkiełkach pokrytych białkiem adhezyjnym, aby promować przyleganie komórek.
Czynniki wzrostu w pożywce indukują dojrzewanie progenitorów do neuronów ruchowych.
W
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych