Mikroiniekcja leku z zapisem elektrofizjologicznym w mózgu szczura

Zacznij od wtrysku, systemu iniekcyjnego zawierającego elektrody. Składa się z mikroigły i srebrnej elektrody umieszczonej w szklanej mikropipecie.

Wypełnij wstrzyknięcie roztworem badanego leku zawierającym barwnik, aby ułatwić śledzenie rozprzestrzeniania się leku w mózgu.

Podłączyć strzykawkę wypełnioną olejem mineralnym do wtryskiwacza. Wytrzyj nadmiar płynu.

Przymocuj ten wtrysk do jednostki stereotaktycznej i podłącz go do systemu mikropompy.

Umieść wstrzyknięcie w docelowym obszarze mózgu znieczulonego szczura z otworem chirurgicznym w czaszce.

Stopniowo obniżaj wtryskiwacz, aby wniknąć w obszar docelowy.

Przerwij wkładanie po otrzymaniu określonych sygnałów elektrycznych, które potwierdzają optymalne umieszczenie wtryskiwacza.

Przykryj odsłoniętą czaszkę ciepłym agarem, aby zapobiec wysuszeniu tkanek.

Pozwól tkance mózgowej się ustabilizować.

Wstrzyknąć żądaną dawkę leku.

Rejestruj sygnały elektryczne w celu monitorowania aktywności neuronalnej w odpowiedzi na podawany lek.

Przygotować wtrysk, najpierw napełniając strzykawkę o pojemności od 5 do 10 mikrolitrów olejem mineralnym. Następnie przygotuj interesujący Cię lek z barwnikiem w soli fizjologicznej. Tutaj 0,5% Chicago Sky Blue miesza się z 300 mikromolowymi GABA. Teraz napełnij pipetę iniekcyjną, najpierw ładując 1-mililitrową strzykawkę przygotowanym roztworem, a następnie używając strzykawki do załadowania pipety.

Podczas wyjmowania strzykawki należy lekko naciskać na tłok, aby podciśnienie nie usunęło roztworu z wstrzykiwacza. Sprawdź, czy w ewentualnych miejscach wycieków nie ulatnia się płyn. Wytrzyj nadmiar płynu i ponownie sprawdź, czy nie ma wycieków. Teraz przymocuj mikrostrzykawkę z olejem mineralnym do wtryskiwacza. Następnie zetrzyj nadmiar roztworu gazą.

Sprawdzić końcówkę wtrysku. Powinno być możliwe przepuszczenie przez niego małych kropel roztworu. W przeciwnym razie jest zablokowany lub przecieka. Teraz bezpiecznie zamontuj wtryskiwacz w systemie mikropompy. Następnie należy przesunąć położenie iniekcji do współrzędnych docelowych i opuścić elektrodę do wzgórka górnego, który można zidentyfikować poprzez rejestrację wizualnych potencjałów wywołanych.

Gdy elektroda jest opuszczona, zastosuj niewielkie nadciśnienie, stosując niską szybkość wtrysku, aby uniknąć zatkania. Przerwij wstrzykiwanie, gdy struktura zostanie osiągnięta. Po wprowadzeniu iniekcji należy przykryć odsłoniętą korę ciepłym agarem, aby zapobiec wysuszeniu. Po ostatecznym umieszczeniu elektrody należy odczekać 30 minut, aby umożliwić ustabilizowanie się tkanki otaczającej elektrodę. Następnie wstrzyknij od 400 do 800 nanolitrów roztworu z szybkością 40 nanolitrów na minutę, aż do dezaktywacji aktywności neuronalnej w wzgórku górnym.

Elektroda powinna wykazywać zmniejszenie kolców podczas wstrzykiwania roztworu hamującego.