JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:26 min. • July 8th, 2025
Weź wzorzyste szkiełko nakrywkowe z hodowlą pierścienia neuronalnego na płytce hodowlanej zawierającej zewnątrzkomórkowy roztwór zapisu.
Komórki te są wstępnie inkubowane z wrażliwym na wapń barwnikiem fluorescencyjnym w celu pomiaru wewnątrzkomórkowego poziomu wapnia.
Umieść płytkę na stoliku mikroskopu fluorescencyjnego.
Umieść okrągłą cewkę magnetyczną podłączoną do stymulatora magnetycznego koncentrycznie w odpowiedniej odległości nad kulturą, aby zapewnić optymalną stymulację.
Za pomocą stymulatora magnetycznego przyłóż wysokie napięcie i prąd przez cewkę, aby wytworzyć zmienne w czasie pole magnetyczne.
To pole magnetyczne indukuje pole elektryczne w neuronach, generując potencjał czynnościowy.
Po dotarciu do zakończenia nerwowego potencjał czynnościowy aktywuje kanały wapniowe bramkowane napięciem, umożliwiając napływ wapnia do komórki i uwolnienie neuroprzekaźnika w synapsie.
To uwolnienie ułatwia przekazywanie sygnału do sąsiednich neuronów poprzez połączenia synaptyczne.
Ze względu na napływ jonów wapnia, jony te wiążą się z wewnątrzkomórkowym barwnikiem wrażliwym na wapń, zwiększając fluorescencję wskazującą na aktywność neuronów.
Aby rozpocząć stymulację magnetyczną, umieść pod mikroskopem kulturę neuronalną, wyhodowaną w okrągły kształt. Stymuluj kulturę za pomocą standardowej okrągłej cewki do stymulacji magnetycznej i stymulatora wspomagającego, które są dostępne w handlu.
Aby stymulować kultury o niestandardowym natężeniu pola magnetycznego, podłącz specjalnie wykonaną cewkę stymulacji magnetycznej do specjalnie zbudowanego stymulatora. Następnie za pomocą wskaźnika laserowego wyrównaj środek kultury ze środkiem cewki, aby zapewnić skuteczną stymulację.
Dostosuj położenie cewki tak, aby pozostawała około pięciu milimetrów nad środkiem kultury. Po prawidłowym ustawieniu cewki stymulacyjnej, załaduj stymulator do potencjału do pięciu kilowoltów. Następnie, za pomocą przełącznika wysokoprądowego, wysokonapięciowego, rozładuj wysokie napięcie i prąd przez cewkę stymulacyjną, aby wygenerować impuls magnetyczny, który stymuluje aktywność hodowanych neuronów.